簡要描述:質(zhì)粒DNA抽提通常是指從大腸桿菌中進(jìn)行小量質(zhì)粒的快速抽提的方法,通過試劑盒采用新型的離子交換柱,在特定條件下,使質(zhì)粒能在離心過柱的瞬間,結(jié)合到質(zhì)粒純化柱上,在一定條件下又能將質(zhì)粒充分洗脫,從而實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,12個(gè)樣品只需不足30分鐘即可完成。
質(zhì)粒DNA抽提:
通常是指從大腸桿菌中進(jìn)行小量質(zhì)粒的快速抽提的方法,通過試劑盒采用新型的離子交換柱,在特定條件下,使質(zhì)粒能在離心過柱的瞬間,結(jié)合到質(zhì)粒純化柱上,在一定條件下又能將質(zhì)粒充分洗脫,從而實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,12個(gè)樣品只需不足30分鐘即可完成。
質(zhì)粒DNA抽提效率:
1.每個(gè)質(zhì)粒純化柱可以結(jié)合的質(zhì)粒量的上限約為20微克。
2.每個(gè)純化柱可用于抽提1-5毫升用LB培養(yǎng)的大腸桿菌。
3.抽提所得質(zhì)粒的OD值一般在1.80左右。
4.抽提獲得的質(zhì)粒量會受質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素影響。
5.抽提獲得的質(zhì)粒DNA的OD值也會因菌種不同等原因而略有波動。
用途:
質(zhì)粒可直接用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞,DNA測序,PCR,基于PCR的突變,體外轉(zhuǎn)錄,轉(zhuǎn)化細(xì)菌,內(nèi)切酶消化等。
所需試劑:溶液I(懸浮液),溶液II(裂解液),溶液III(結(jié)合液),溶液IV(洗滌液),溶液V(洗脫液),RNase A(100mg/ml),質(zhì)粒純化柱,廢液收集管等
保存條件:
室溫保存,一年有效。
注意事項(xiàng):
1.*次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液I(懸浮液)中,混勻,并在瓶上做好標(biāo)記。加入RNase A后4℃存放。
2.*次使用前在每瓶溶液IV(洗滌液)中加入54ml無水乙醇,混勻,并在瓶上做好標(biāo)記。
3.溫度較低時(shí),溶液II和溶液III可能會有沉淀產(chǎn)生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀,37℃水浴加熱溶解,混勻后使用。溶液II請勿過分劇烈混勻,否則會產(chǎn)生大量氣泡。
4.溶液II使用完后,一定要蓋緊瓶蓋,防止被空氣中二氧化碳酸化。
5.溶液II有強(qiáng)堿性,溶液II和溶液III對人體都有刺激性,操作時(shí)請小心,并注意適當(dāng)防護(hù)。
6.所有操作均在室溫進(jìn)行,操作時(shí)無需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。
7.廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。
8.為了安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。